來自能移植的大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞。這些細胞表達神經生長因子(NGF)受體。NGF可誘導產生神經表型。這些細胞不合成腎上腺素。PC-12(高分化)“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間,與細胞世代或倍增不同。在一代中,細胞培增3~6次。細Chemicalbook胞傳代后,一般經過三個階段:游離期、指數增生期和停止期。常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度,即細胞群的分裂相數/100個細胞。一般細胞分裂指數介于0.2%~0.5%,腫瘤細胞可達3~5%。接種2~3天分裂增殖旺盛,是活力好時期,稱指數增生期(對數生長期),適宜進行各種試驗。
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞培養操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%Z醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片浸在培養液中;
5.將培養板在5%CO2水浴孵箱中37°C孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。